产品目录

本制品由7种不同长度的单链DNA分子混合而成的单链DNA Ladder，7条带的大小为20、25、30、35、40、50、75nt。其中35nt浓度约为100ng/μL，其余条带浓度约为50ng/μL。该产品已经含有上样缓冲液，使用前70度处理5分钟后可以直接上样。

单链DNA Ladder(20～75nt)适用于跑尿素变性胶，电泳后使用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒，核酸PAGE电泳染色试剂盒，核酸快速染色试剂盒或核酸染料如RealGood Red或RealGood All均可以得到清晰的条带分离效果。

• 单链DNA Ladder产品适用于变性PAGE垂直电泳，不适用于水平琼脂糖凝胶电泳。
  
• 本制品仅供科研实验使用，不可用于食品、医疗等用途。

• 凝胶制备：
  
  • 可以选择DNA尿素PAGE电泳试剂盒或按照以下程序制胶。
    表一：TBE-尿素PAGE分离胶配方表(总体积5mL，适用于厚度1.0mm小板胶)
    

    单链DNA长度	最佳凝胶浓度	尿素	40% PAA(29:1)	10×TBE	补水到总体积	10% APS	TEMED
    200～1000nt	5%	2.1g	0.625mL	0.5mL	5mL	50μL	5μL
    50～400nt	8%		1mL
    30～300nt	10%		1.25mL
    10～150nt	15%		1.875mL
    5～120nt	20%		2.5mL

    
    
  • 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5cm的水层，使凝胶表面保持平整。
    
  • 静置10～20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
    
    • 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
  • 去除覆盖在分离胶上的水层；按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合；最后加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
    表二：TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表(总体积2mL，适用于1.0mm厚度胶)
    

    凝胶浓度	尿素	40% PAA(29:1)	10×TBE	灭菌水	10% APS	TEMED
    4%	0.84g	0.2mL	0.2mL	补水至体积2mL	20μL	2μL

    
    
  • 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
    
  • 静置30～60分钟，等待浓缩胶聚合。
    • 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
• 样品制备：
  
  • 取适量体积单链DNA Marker样品（不用添加上样缓冲液）；待测样品与等体积的2×TBE尿素上样缓冲液混合，70℃处理5分钟，冰浴制冷后待上样。
• 电泳：
  
  • 预电泳(可选)：电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200V预电泳30分钟。电泳结束后，用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2～3次，去除残余的尿素。
    
  • 上样：根据梳齿确定Marker上样量，一般是10齿1mm厚梳子上样5μL，15齿1mm厚梳子上样3μL。
    
  • 连接电源线，打开电源开关，按照以下条件电泳。
    

    	恒电压	起始电流	结束电流	电泳时间	适用条件
    推荐电压	200V	15～20 mA/板胶	10～15 mA/板胶	60+ min	最佳电压，最优的分辨率

  • 等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续实验。
    

    变性胶浓度	溴酚蓝	二甲苯菁
    5%	35nt	130nt
    8%	19nt	75nt
    10%	15nt	55nt
    15%	10nt	52nt
    20%	8nt	35nt

• 染色：
  用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒，核酸PAGE电泳染色试剂盒或核酸快速染色试剂盒染色均可得到清晰的条带分离效果。
  
  • 如果使用核酸染料染色，RealGood Red或RealGood All核酸染料结合单链核酸效果最佳，强烈建议使用以便获得最佳效果的胶图。其余染料如GelRed，Goldview，EB等染色效果不好。

1．使用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒染色 15% Urea-PAGE 1×TBE 200V 55min lane 1～7：ssDNA上样量为1μg lane 8～10：ssDNA Ladder上样量5μL	2．使用核酸PAGE电泳染色试剂盒染色 15%尿素变性胶分离单链DNA 1ane1～7：ssDNA，上样量1μg lane8：ssDNA Ladder，上样量5μL
3．使用RealGood Red染色结果 200V 17-9mA 55min RealGood后染法	4．使用核酸快速染色试剂盒染色结果 20% TBE-Urea PAGE 1×TBE恒压200V 14～5mA 62min ×1表示未稀释；×20表示稀释20倍 注：RFT202的25nt条带不能有效银染